Какой метод определения активности щелочной протеазы?
Каков метод Щелочная протеаза обнаружение активности?
Активность фермента относится к способности фермента катализировать определенные химические реакции. Величина активности фермента может быть выражена скоростью определенной химической реакции, которую он катализирует в соответствующих условиях. Измерение активности ЛяонинаЩелочная протеазафермент на самом деле измеряет скорость химической реакции, катализируемой ферментом. Скорость ферментативной реакции может быть выражена уменьшением субстрата реакции или увеличением продукта за единицу времени. Для чувствительности обычно измеряется количество продукта, произведенного за единицу времени. Поскольку скорость ферментативной реакции может постепенно уменьшать свое значение увеличения с течением времени, для того, чтобы правильно измерить активность фермента, необходимо определить начальную скорость ферментативной реакции.
ПринципЩелочная протеазаПринцип определения активности метода Фолина
Щелочная протеазаможет катализировать гидролиз казеина до тирозина в щелочных условиях. Тирозин — это аминокислота, содержащая фенольную гидроксильную группу, и может реагировать с Фолином (смесь фосфорновольфрамовой кислоты и фосфорномолибденовой кислоты). (Реакция Фолина с фенолом: реагент Фолина крайне нестабилен в щелочных условиях, и его легко количественно восстановить фенольными соединениями, чтобы получить смесь вольфрамового синего и молибденового синего, показывающую другой оттенок синего.) С помощью колориметрии То есть можно определить количество полученного тирозина, а количество тирозина, полученного при гидролизе казеина по ЛяонинуЩелочная протеазав единицу времени используется для выражения активности фермента, тем самым рассчитывая активность фермента.
Экспериментальная процедура определенияЩелочная протеазаактивность
Приготовление раствора фермента: точно взвесьте 1 г (±0,001) сухого порошка фермента, добавьте 10 мл буферного раствора (2.2.5), растворите в небольшом стакане и перемешайте стеклянной палочкой. После того, как выстоите некоторое время, осторожно вылейте раствор верхнего слоя в мерную колбу. В середину добавьте небольшое количество буферного раствора к осадочной части, перемешайте и растворите таким образом 4 раза и, наконец, перенесите все в мерную колбу объемом 100 мл. Доведите до отметки буферным раствором, хорошо встряхните и отфильтруйте через четыре слоя марли. Наберите 5 мл фильтрата, перенесите его в мерную колбу объемом 100 мл, разбавьте до отметки дистиллированной водой и разбавьте ферментную жидкость в 2000 раз.
ОпределениеЩелочная протеазаактивность
ОпределениеЩелочная протеазаЕдиница активности: 1 граммЩелочная протеазаПорошок может производить 1 микрограмм тирозина в минуту при условиях рН 10 и 40°C, что рассматривается как единица активности фермента.
Меры предосторожности при определенииЩелочная протеазаактивность
1. Температура, рН и время ферментативной реакции оказывают непосредственное влияние на количество гидролизуемых пептидных связей, поэтому их необходимо строго контролировать.
2. После прекращения реакции с трихлоруксусной кислотой фильтрат, полученный при фильтровании реакционной смеси, должен быть прозрачным.
3. Поскольку реагент Фолина чувствителен к кислой среде и склонен к изменениям, в порядке измерения есть условие. Необходимо добавить раствор карбоната натрия для образования щелочной среды, а затем добавить реагент Фолина для того, чтобы он нормально функционировал.
Выше приведены связанные статьи о щелочной протеазе, которыми я поделился для вас. Если вы хотите узнать другие связанные статьи оЩелочная протеаза, пожалуйста, свяжитесь с нами.
