Какой метод определения активности щелочной протеазы?

Какой метод определения активности щелочной протеазы?

    Активность фермента относится к способности фермента катализировать определенные химические реакции. Размер активности фермента может быть выражен скоростью определенной химической реакции, которую он катализирует в соответствующих условиях. Измерение активности фермента щелочной протеазы Ляонин на самом деле измеряет скорость химической реакции, катализируемой ферментом. Скорость ферментативной реакции может быть выражена уменьшением субстрата реакции или увеличением продукта в единицу времени. Ради чувствительности количество продукта, произведенного за единицу времени, обычно измеряется. Поскольку скорость ферментативной реакции может постепенно уменьшать значение ее увеличения с течением времени, для правильного измерения активности фермента необходимо определить начальную скорость ферментативной реакции.

Принцип определения активности щелочной протеазы Принцип фолина

     Щелочная протеаза может катализировать гидролиз казеина до тирозина в щелочных условиях. Тирозин - это аминокислота, содержащая фенольную гидроксильную группу, которая может реагировать с фолином (смесью фосфорновольфрамовой кислоты и фосфорно-молибденовой кислоты). (Реакция фолина с фенолом: реагент фолина является чрезвычайно нестабильным в щелочных условиях, и фенольные соединения легко количественно восстанавливают, чтобы получить смесь вольфрамового синего и молибденового синего, показывая другой оттенок синего.) Использование колориметрии. количество продуцируемого тирозина может быть определено, и количество тирозина, продуцируемого гидролизом казеина с помощью Ляонин щелочной протеазы в единицу времени, используется для выражения активности фермента, таким образом, вычисляя активность фермента.

Экспериментальная методика определения активности щелочной протеазы

    Приготовление раствора фермента: точно взвесить 1 г (± 0,001) сухого порошка фермента, добавить 10 мл буферного раствора (2.2.5), растворить в маленьком стакане и перемешать стеклянной палочкой. Постояв некоторое время, осторожно вылейте раствор верхнего слоя в мерную колбу. В середине добавьте небольшое количество буферного раствора в часть осадка, перемешайте и растворите 4 раза таким образом и, наконец, перенесите все в мерную колбу объемом 100 мл. , Нанести до отметки буферным раствором, хорошо встряхнуть и процедить четырьмя слоями марли. Возьмите 5 мл фильтрата, перенесите его в мерную колбу объемом 100 мл, разбавьте до отметки дистиллированной водой и разбавьте ферментную жидкость в 2000-кратном уровне.

Определение активности щелочной протеазы

     Определение единицы активности щелочной протеазы: 1 грамм порошка щелочной протеазы может производить 1 микрограмм тирозина в минуту в условиях pH 10 и 40 ° C, что рассматривается как единица активности фермента.

 Меры предосторожности для определения активности щелочной протеазы

  1. Температура, pH и время реакции фермента оказывают непосредственное влияние на количество гидролизуемых пептидных связей, поэтому их необходимо строго контролировать.

  2. После завершения реакции с трихлоруксусной кислотой фильтрат, полученный фильтрованием реакционной смеси, должен быть прозрачным.

  3. Поскольку реагент Фолина чувствителен к кислой среде и подвержен изменениям, во время измерения в заказе есть оговорка. Необходимо добавить раствор карбоната натрия для образования щелочной среды, а затем добавить реагент Фолин, чтобы он функционировал нормально.

  Выше приведены статьи о щелочной протеазе, которыми я поделился для вас. Если вы хотите узнать другие статьи о щелочной протеазе, пожалуйста, свяжитесь с нами.